Petrischalen maken voor mycologische teelt: gids voor beginners

Champignonteelt en mycologie, de studie van paddenstoelen, zijn fascinerende vakgebieden die steeds meer fans, zowel amateurs als professionals, aantrekken.

Voor degenen die meer willen leren over het kweken van paddenstoelen in het laboratorium of thuis, is het gebruik van petrischalen een essentieel startpunt.

Deze praktische gids legt uit waarom u petrischalen moet gebruiken, hoe u het juiste kweekmedium kiest en presenteert een eenvoudige methode voor het voorbereiden en uitgieten van agarplaten voor uw mycologische experimenten.

Waarom petrischalen gebruiken in de mycologie?

Petri-schalen zijn platte en transparante containers, meestal van plastic of glas, die voornamelijk worden gebruikt om micro-organismen te kweken op een voedingsgel.

In de mycologie creëren ze een gecontroleerde omgeving om de groei van schimmels te observeren en te bestuderen, of het nu gaat om onderzoek, klonen, selectie van stammen of gewoon om te leren. Petrischalen bieden verschillende voordelen:

1. Controle van de teeltomstandigheden: hiermee kunt u parameters manipuleren zoals het type medium, temperatuur, vochtigheid en blootstelling aan licht.
2. Gemakkelijke observatie: het transparante deksel maakt directe observatie van de ontwikkeling van mycelia mogelijk zonder de doos te openen, waardoor het risico op besmetting wordt geminimaliseerd.
3. Gemak van isolatie en selectie: met petrischalen kunnen specifieke stammen worden geïsoleerd of gezonde mycelia worden geselecteerd voor toekomstige culturen.

De verschillende kweekmedia voor petrischalen en hun nut

De keuze van het groeimedium is cruciaal in de mycologie, omdat dit rechtstreeks van invloed is op de groei en gezondheid van paddenstoelen. Groeimedia zijn er in de vorm van poeders om met water te mengen en zijn verrijkt met verschillende voedingsstoffen om de groei van schimmels te bevorderen. Hier zijn de belangrijkste soorten groeimedia en hun toepassingen:

1. MPA-medium (mout, pepton, agar-agar): dit medium is een klassieker in de mycologie. Het is ideaal voor de vermenigvuldiging van de meeste mycelia. Door de uitgebalanceerde samenstelling bevordert het een snelle en gezonde groei van paddenstoelen, waardoor het een uitstekende keuze is voor beginners.

2. medium “Sabouraud + Antibioticum”: Dit medium is verrijkt met antibioticum (chlooramfenicol) om de ontwikkeling van bacteriën te beperken en de cultuur zeer selectief te maken. Het wordt aanbevolen voor delicater werk, zoals het klonen van paddenstoelen uit de natuur of het ontkiemen van sporen. De groei van mycelia op dit medium is echter over het algemeen langzamer dan bij MPA.

3. Pure agar-agar: Als je wilt experimenteren of je eigen mediarecepten wilt maken, is pure agar-agar apart verkrijgbaar. Het is mogelijk om het te verrijken met verschillende ingrediënten zoals aardappelextract, mout, hondenbrokjes, mestextract, suiker, zaagsel etc., afhankelijk van de specifieke behoeften van de paddenstoelen die je kweekt.

4. Water Agar Medium: Dit medium is een agar zonder verrijking, voornamelijk gebruikt voor specifiek laboratoriumwerk zoals stamzuivering of selectie.

Bezoek onze producten hier om ons assortiment kweekmedia voor petrischalen te ontdekken.

Ook onze steriele petrischalen, perfect voor deze toepassingen, kunt u hier kopen.

Recept voor het bereiden van MPA- of Sabouraud-agar

Het bereiden van een agar is een essentiële stap bij het kweken van paddenstoelen in petrischalen. Zo maakt u eenvoudig een MPA- of Sabouraud-kweekmedium:

Benodigde ingrediënten:

• 47 g MPA- of Sabouraud-mediumpoeder.
• 1 liter heet water (bij voorkeur gedestilleerd of gedemineraliseerd).

Voorbereidingsstappen:

1. Mengen: Meng 47 g medium poeder in 1 liter heet water. Meng goed om ervoor te zorgen dat het poeder volledig is opgelost.

2. Sterilisatie: Steriliseer het mengsel gedurende 20 tot 30 minuten bij 121°C (15 PSI). Dit kan worden gedaan met behulp van een autoclaaf of snelkookpan. Deze stap is cruciaal om ongewenste micro-organismen te elimineren.

3. Afkoelen: Laat het mengsel afkoelen tot ongeveer 45-50°C. Deze koeling is belangrijk om condensvorming op de deksels van de petrischalen te voorkomen.

4. Gieten: Giet de agar in een steriele omgeving (onder een laminaire stromingskap of in de buurt van een bunsenbrander) in de petrischalen. Zorg ervoor dat de dikte van de agar ongeveer 0,5 tot 1 cm is.

5. Sluiten: Sluit de petrischalen snel om besmetting door omgevingslucht te voorkomen.

Steriliteitstechnieken in de mycologie

Steriliteit is een van de meest cruciale factoren bij het kweken van paddenstoelen, omdat verontreinigingen, zoals bacteriën en schimmels, snel uw gewassen kunnen binnendringen en uw werk kunnen verpesten. In de mycologie is het creëren van een steriele omgeving tijdens het hele kweekproces daarom essentieel om betrouwbare resultaten te verkrijgen. Hier volgen enkele essentiële steriliteitstechnieken om het risico op besmetting te minimaliseren.

1. Met behulp van een laminaire stromingskap

Een laminaire stromingskap is een apparaat dat is ontworpen om een ​​steriele omgeving te creëren door lucht te filteren en deze in een uniforme richting te duwen. Dit helpt de circulatie van verontreinigde lucht op werkoppervlakken te beperken. Als u geen zuurkast heeft, kunt u in de buurt van de vlam van een bunsenbrander werken, waardoor een steriele luchtbarrière ontstaat.

2. Draag handschoenen en een masker

Het wordt aanbevolen om vóór het hanteren steriele handschoenen en een gezichtsmasker te dragen. Desinfecteer uw handschoenen met 70% isopropylalcohol voordat u met elke manipulatie begint. Dit verkleint de mogelijkheid dat verontreinigende stoffen van handen naar gewassen worden overgebracht.

3. Sterilisatie van gereedschappen

Alle gebruikte gereedschappen, zoals scalpels, pincetten of naalden, moeten worden gesteriliseerd. Het gebruik van een bunsenbrander om deze instrumenten met hitte te steriliseren is een gebruikelijke methode. Het is ook mogelijk om ze te steriliseren met 70% isopropylalcohol gevolgd door een vlam om de alcoholresten te verbranden.

4. Sterilisatie van kweekmedia

Kweekmedia (agar, vloeistoffen) moeten vóór gebruik worden gesteriliseerd. De meest gebruikelijke methode is om ze gedurende 20 tot 30 minuten te autoclaveren of onder druk te koken op 121 °C om ongewenste micro-organismen te elimineren.

5. Desinfectie van het werkoppervlak

Het werkoppervlak moet voor en na elke werksessie grondig worden gereinigd en gedesinfecteerd. Voor het desinfecteren van oppervlakken, dozen en andere te hanteren materialen kan een alcoholspray van 70% of een verdunde bleekoplossing worden gebruikt.

6. Minimale opening van petrischalen

Bij het werken met petrischalen is het belangrijk om deze zo weinig mogelijk te openen en de opening naar de steriele luchtstroom of de bunsenbrander te houden om besmetting door omgevingslucht te voorkomen.

Typisch voorbeeld: een carpophore uit de natuur verzamelen voor een cultuur

Hier is een voorbeeld waarin de stappen worden beschreven die moeten worden gevolgd om een ​​carpophore (het zichtbare deel van de paddenstoel) uit de natuur te verzamelen, deze te kweken op Sabouraud + chlooramfenicolagar voor klonering, deze vervolgens te vermenigvuldigen op MPA-agar en ten slotte een vloeibare cultuur uit te voeren.

Stap 1: Voorbereiding van cultuurmedia

• Bereid Sabouraud + chlooramfenicolagar volgens de instructies beschreven in het vorige artikel.
• Bereid ook MPA-agar voor, die later zal worden gebruikt voor myceliumvermenigvuldiging.

Stap 2: Verzameling van de Carpophore

• Zoek een gezonde carpophore in de natuur.
• Reinig in een steriele omgeving het oppervlak van de carpophore met een watje gedrenkt in isopropylalcohol om de meeste externe verontreinigingen te verwijderen. Scheur de paddenstoel en vermijd het aanraken van de interne delen van de paddenstoel.
• Knip met een gesteriliseerd scalpel een klein stukje van het interne weefsel van de paddenstoel uit. Werk snel om blootstelling aan lucht tot een minimum te beperken.

Stap 3: Inenting op Sabouraud Agar + chlooramfenicol

• Plaats het bemonsterde stukje weefsel in een petrischaaltje met Sabouraud-agar verrijkt met chlooramfenicol (om de bacteriegroei te beperken).
• Sluit de petrischaal snel en plaats deze in een broedmachine op een geschikte temperatuur (meestal rond de 25-27°C voor de meeste paddenstoelensoorten).
• Controleer de bak regelmatig op de groei van mycelium, die eruit zou moeten zien als witte filamenten.

Stap 4: Vermenigvuldiging op MPA-agar

• Zodra het mycelium goed ontwikkeld is op de Sabouraud-agar, brengt u een stukje van dit gezonde mycelium met een steriel scalpel over naar een nieuwe petrischaal met MPA-agar.
• Deze overdracht versnelt de groei van het mycelium in een voedzamere omgeving.

Stap 5: Een vloeibare cultuur voorbereiden

• Wanneer het mycelium zich goed heeft voortgeplant op de MPA-agar, is het tijd om over te stappen op een vloeibare cultuur voor een grotere biomassaproductie.
• Bereid een steriel vloeibaar kweekmedium, zoals moutbouillon, door het in een autoclaaf te steriliseren.
• Inoculeer dit medium in een bioreactor of een steriele fles met een stukje mycelium uit de MPA-agar.
• Plaats de fles in een droge, donkere omgeving op een geschikte temperatuur en schud hem regelmatig om een ​​goede ventilatie van de omgeving te garanderen.

Conclusie

Het maken van petrischalen met de juiste kweekmedia is een fundamentele maar essentiële vaardigheid voor elke beginner in de mycologie. Met de juiste tools en producten, zoals die beschikbaar zijn op onze site lamycosphere.com, kun je gemakkelijk beginnen aan de fascinerende studie van paddenstoelen.

Bedenk dat succes in de mycologie grotendeels afhangt van het volgen van sterilisatieprocedures en het kiezen van het kweekmedium dat geschikt is voor uw project. Veel groeiplezier!